am8亚美
微晶电子衍射MicroED
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IL5RA-AF17121多肽复合物

IL5RA-AF17121多肽复合物共晶尺寸太小,无法满足同步辐射所需晶体尺寸要求。最终使用MicroED技术乐成解析出区分率为3?的结构。
  • 配景
    IL-5是Th2细胞排泄的细胞因子,加入调控嗜酸性粒细胞的功效,与T2-低哮喘和高嗜酸性粒细胞综合征有关。IL-5与IL-5受体结合可激活IL-5发挥作用,因此滋扰IL-5受体的激活成为各人研究的偏向之一。

    AF17121是IL-5的抑制性多肽,在2019年被报道与IL-5受体的α亚基(IL5RA)结合,从而抑制IL-5与IL-5受体的结合。

    am8亚美利用MicroED三位电子衍射技术乐成解析了IL5RA-AF17121多肽复合物结构。
  • 实验结果
    1、卵白表达
    IL5RA卵白表达易泛起容纳体。在获得容纳体后,对其进行纯化和复性,最终获得纯度大于90%的IL5RA可溶卵白。将IL5RA 和多肽AF17121孵育,通太过子筛的要领纯化IL5RA-AF17121多肽复合物。
    图一 分子筛和SDS-PAGE结果
  • 2、晶体生长和衍射数据收集
    实验多种结晶计划均无法获得合适尺寸的可用于X射线衍射的晶体。
    我们将10μM巨细的晶体铺到铜网上,用Cryo-FIB切出200nm厚度的薄片,用MicroED收集衍射数据。
    图2 Cryo-FIB和MicroED衍射图
    A 10μM巨细的晶体;B 晶体铺到铜网并用Cryo-FIB切成200nm薄片;C MicroED收集衍射数据
  • 3、结构解析
    凭据收集到的衍射数据结合软件解析IL5RA-AF17121多肽复合物的结构,区分率为3?。
    图三 IL5RA-AF17121复合物结构
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