am8亚美
结构生物学技术效劳
结构生物学技术效劳

am8亚美冷冻电镜CryoEM-SPA

什么是冷冻电镜技术?
随着结构生物学的生长,基于结构的药物设计已经成为新药的主流开发模式(即凭据靶标卵白结合位点的结构来筛选潜在的结合分子)。冷冻电镜单颗粒技术(CryoEM-SPA),一种在低温状态下使用透射电子显微镜视察样本的显微技术,受到了越来越多的关注,并将逐渐比肩或逾越古板晶体衍射技术,在生物学、医学、药物开发中发挥至关重要的作用。
技术简介冷冻电镜单颗粒法的事情原理
冷冻电镜单颗粒技术利用电子散射机制,通过低温冷冻而大大降低了高能电子束对分子结构的损伤,此后通过将散射信号转换为数以万计的单颗粒图像并依此进行三维结构重构。近年来,冷冻电镜的技术手段被不绝提升,能够确定的区分率也越来越高,实现了生物大分子的近原子级区分率。冷冻电镜单颗粒法已经成为了解析种种卵白分子结构的通例手段,与X射线晶体衍射和核磁共振配合组成了高区分率结构生物学的基础。
技术优势为什么选择冷冻电镜单颗粒法
? 快速冷冻制样处理,可使样本坚持近自然水合状态
? 无需结晶,可解析业界难点膜卵白
? 微克级样品需求,对卵白纯度耐受性高
? 允许检测同一靶卵白的多种构象
? 可解析大型卵白复合物的结构
效劳优势为什么选择am8亚美
1、am8亚美提供从基因合成、卵白表抵达冷冻电镜结构解析的一站式定制化效劳,拥有专业的卵白生产、纯化团队和电镜专家团队;
2、am8亚美自拥有200kV冷冻电镜平台,配备Vitrobot冷冻机械人,同时与海内外多家机构深度相助,拥有富足的300kV冷冻电镜商业机时;
3、am8亚美提供实时响应、随时相同的程序化效劳,便当客户定制计划、掌握项目进展、拿到期望的结果。
效劳流程
1、卵白样本:客户可选择直接提供卵白样本,或指定特定卵白,由am8亚美进行卵白的表达、纯化历程;
2、负染检测及评估:一种简单快速的评价样实质量的要领。将重金属染色剂应用于样本,增强比照度,可以快速可视化地进行样实质量开端评估。这一办法中主要评估样本的均匀性(卵白/复合物状态)、疏散性、卵白质/复合物的巨细和形状、卵白质浓度(视察颗粒漫衍情况)。
3、冷冻制样及评估:在制备冷冻样品之前应确保样品经过完备的生化提纯历程,以具备较低的结构异质性;同时还要包管卵白分子活性。冷冻制样通常将微量样本(3-5μl)交由Vitrobot进行处理,制备出一层极薄的分子溶液层,并由液乙烷快速冷冻。冷冻后,样品中的水分子不会形成结晶冰 ,而会形成无定形(玻璃状)冰层。此时样天职子将较好地漫衍在冰层中。在开始收罗数据前,仍需对冷冻样品进行诊断评估,包括卵白浓度、漫衍、稳定性,冰层的质量、厚度、均匀度和载网的均一性。
4、数据收罗、处理:高度稳定的200kV及300kV冷冻电镜提供高通量、自动化的数据收集。这一历程中透射电镜将收罗数万张至数百万张高区分率单颗粒图片,并由特定的算法程序进行数据整理。
5、三维重构、模型建立:大分子的三维重构依赖于对数以万计的颗粒图片进行平均,这个历程中数据需要经过多步处理,需要挪用适当的盘算资源。在剖析结构前,需要进行完好的数据基础存储架构,用来支持可生成TB级数据的冷冻电镜设施。三维重构的焦点是软件算法,可用于测定及整合每一张照片的诸多参数,如空间取向,此后才华将二维的图片整合重构为三维的模型。
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