am8亚美
冷冻电镜SPA
技术资源

G卵白偶联受体 (GPCR) - GCGR

冷冻电镜单颗粒法常用于难以或无法结晶卵白的结构解析。2020年,在Science上宣布了一篇G卵白偶联受体(GPCR)-GCGR卵白的结构信息,该卵白的结构解析事情由am8亚美的技术人员完成。
  • 配景
    G卵白偶联受体(GPCR)属于膜卵白,膜卵白的膜内区域具有广泛的疏水外貌,从膜上解离下来后在极性的水溶液中难以稳定保存,往往无法使用通例的结晶要领获得其结构信息。

    人胰高血糖素受体(GCGR)是B类GPCR家族的成员,对葡萄糖的平衡至关重要,有望成为糖尿病和肥胖症治疗的潜在药物靶点。本研究通过冷冻电镜单颗粒法解析了GCGR与其同源配体胰高血糖素和异源三聚体Gs或Gi1卵白的结构,以研究GCGR与G卵白相互作用的分子机制。
  • 实验结果
    1、卵白表达
    GCGR表达量极低,难以进行后续的纯化实验。为了获得合适可进一步实验的卵白复合物,不绝对载体和表达系统进行调解摸索。并在卵白表达历程中加入单克隆片段,以增加复合物的稳定性。
    图一 Glucagon-GCGR-Gs-Nb35复合物和Glucagon-GCGR-Gi1-scfv16复合物卵白表达结果
  • 2、冷冻制样
    在卵白制样阶段,卵白样品大多停留在载网支持膜上,而非支持膜孔的冰层中。且卵白样品保存较严重的取向优势。

    通过改变卵白样品的浓度,更换载网类型,最终使样品大宗入孔。通过增加冷冻冰层的厚度,在载网上铺设碳膜,平均差别取向的颗粒数,使卵白颗粒的优势取向获得改善。
    图二 Glucagon-GCGR-Gs-Nb35复合物Cryo-EM图像
    图三 Glucagon-GCGR-Gi1-scfv16复合物Cryo-EM图像
  • 3、结构解析
    通过数据处理和三维重构,获得glucagon-GCGR–G卵白复合物的结构信息。
    图四 Glucagon-GCGR–G卵白复合物的整体结构
    (A, B) glucagon-GCGR-Gs-Nb35复合物的结构,区分率为3.7 ?; (C, D) Glucagon-GCGR-Gi1-scfv16复合物的结构,区分率为3.9 ?
  • 参考文献
留言板
0.114867s
sitemap网站舆图